Benutzerdefinierte mRNA-Synthese, mRNA Transkription, RNA-Transkript

Benutzerdefinierte mRNA-Synthese, mRNA Transkription, RNA-Transkript

Polyadenylierte und mRNA mit Cap bietet den entscheidenden Vorteil der Integration freien Genexpression. Eine Reihe von modifizierten Nukleotiden für reduzierte Immunstimulation, verbesserte Übersetzung und erhöhte Nuklease Stabilität zur Verfügung. TriLink die individuelle mRNA Transkription Service bietet einige außergewöhnliche Vorteile, darunter:

    Maßgeschneiderte Unterstützung spezifische Anwendung oder ein Programm Bedürfnisse von Template-Verstärkung auf eine Vielzahl von Modifikationen, Behandlungen und Reinigungsmöglichkeiten gerecht zu werden. Hochwertige mRNA zu äußerst wettbewerbsfähigen Preisen aufgrund in Eigenfertigung wichtiger Rohstoffe begrenzt. Breites Spektrum der Transkription der RNA-Synthese Skalen ergeben µGramm bis zu Hunderten von Milligramm. Vollständig rückverfolgbar Dokumentationssystem.

In einer Transkriptionsreaktion erzeugt eine RNA-Polymerase viele Kopien von RNA von einer DNA-Matrize transkribiert, die die RNA kodiert. RNA-Transkript-Synthese ist eine Alternative zur chemischen Synthese und RNA ist nützlich, wenn ein langer und / oder verkappt modifizierte mRNA benötigt wird.

Ausbeuten von chemisch synthetisierte RNA Abnahme exponentiell mit zunehmender Länge, weil Kopplungseffizienzen bei jedem Schritt 90-99% liegen (abhängig von der Art der eingebauten Base). Somit ist es nicht möglich, chemisch sehr lange RNA zu synthetisieren. Im Gegensatz dazu sind Bakteriophagen-Polymerasen, wie T7-RNA-Polymerase, ganz prozessive und es ist daher möglich, die RNA durch Transkription zu erhalten, die Tausende von Basen lang und wandern als eine einzelne Bande auf einem denaturierenden Gel sind.

Capped-mRNA & ARCA

In Zellen, übersetzt das Ribosom-mRNA in Proteine. mRNA in eukaryotischen Zellen hat eine 5′ cap [m7G (5 ‚) ppp (5‘) G], die die mRNA und verbessert die Übersetzung stabilisiert. Eine Kappe kann, indem eine Mischung aus analogen und cap GTP (: 1-Verhältnis in der Regel bei einer 4) in der mRNA-Transkription inkorporiert werden. Etwa 80% der synthetisierten mRNA eine 5 besitzen′ Kappe, während die restlichen 20% besitzen eine 5′ Triphosphat. In einigen Fällen ist es wünschenswert, die 5 zu entfernen′ Triphosphat mit einer Phosphatase-Behandlung.

Die erste Kappe Analog eingeführt werden sollte mCAP [m7G (5′) Ppp (5′)G]. 50% der Zeit wird mCAP in der korrekten Orientierung eingefügt Übersetzung zu verbessern. Die anderen 50% der Moleküle sind keine Substrate für eine effiziente Translation, die spezifische Aktivität des RNA-Transkripts zu reduzieren. Vor kurzem wurde Anti-Reverse-Cap Analog (ARCA) eingeführt [3′ O-Me-m7G (5′) Ppp (5′) G] (1). ARCA kann nur in der richtigen Ausrichtung einzufügen, in verkappten mRNAs führt, die doppelt so effizient wie die mit mCAP initiiert umgesetzt werden. Effiziente Translation der mRNA in Protein erfordert auch eine poly (A) -Schwanz. Dies kann durch Einschließen eines poly (dT) Dehnung am Ende des Transkriptionsvorlage eingeführt werden. Häufig wird dies durch eine PCR-Schritt durchgeführt, der eine Primer die Poly (dT) stretch enthält verwendet.

Vorlagen

Eine mRNA-Transkriptions Vorlage einen Bakteriophagen-Promotor, oder ein Plasmid oder PCR-Produkt, das die Sequenz von Interesse enthalten, können abgegeben werden. TriLink das Plasmid oder PCR-Produkt und fügen die erforderlichen Elemente (Promotor und Poly (A) -Schwanz, wenn erforderlich), um die PCR-Primer amplifiziert.

Waage & Die Renditen

Synthese Skalen ergeben µGramm bis zu Hunderten von Milligramm zur Verfügung. Zitate basieren auf mRNA-Transkriptionsstartsynthesemaßstab aufgrund der hohen Grad an Variabilität bei der Transkription der RNA-Synthese Ausbeuten von Vorlage zu Vorlage. TriLink wird eine konservative Schätzung der Skala notwendig machen, die erforderliche Menge zu erhalten. Alle verkappte mRNA produziert werden versendet.

Eine Tabelle der Transkription der RNA-Synthese erwartenden Erträge für ein 1-2 Kilobasen- Transkript ist unten. Schluss Erträge sind nicht garantiert, können Variationen verursacht werden durch viele Faktoren einschließlich Sequenz, Länge und Basenzusammensetzung. Der Einbau von modifizierten Basen wird auch endgültige Ertrag auswirken. Einige Änderungen, wie 5-Methyl-C haben wenig Wirkung auf die endgültige Ausbeute während 2 ‚Fluoro Modifikationen eine große Wirkung haben können.

Die Transkription RNA Synthese Skala *

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